미생물의 분리 및 재배

一 、 분리 및 재배

미생물은 자연에서 혼합 상태로 존재합니다. 원하는 균주를 얻기 위해서는 이들을 분리해야합니다. 그것이 보존 될 때 우발적으로 오염 된 경우, 그것은 정제되어야합니다. 미생물의 분리 및 정제 방법에는 여러 가지가 있지만 기본 원리는 비슷합니다. 즉, 분리 할 샘플을 어느 정도 희석하고 미생물의 세포 (또는 포자) 를 가능한 한 분산 상태로 유지합니다. 그리고 나서 그들은 순수한 단일 식민지로 자랍니다. 그러나 위의 작업은 미생물을 다른 멸균 매체로 옮기는 접종 과정과 분리 할 수 없습니다.

미생물 접종 분류 재료 및 도구:

일정한 온도 인큐베이터, 접종 링, 유리 막대, 피펫, 알코올 램프, 배양 배지, E. coli, Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, 효모 등

접종 수술 방법:

1. 경사 접종 (Staphylococcus aureus 연결)

작동하기 전에 75% 알코올로 손을 닦고 알코올이 휘발되면 알코올 램프를 발화하십시오. 스트레인 튜브와 기울어 진 표면을 왼쪽 엄지와 다른 네 손가락 사이에 잡고 기울어 진 표면과 변형이있는 측면이 위쪽과 수평 위치를 향하도록합니다. 먼저, 기울기의 변형과 탐폰을 회전시켜 접종시 쉽게 꺼낼 수 있습니다. 접종 링을 왼손에 잡고 (펜을 들고 다니는 것과 같이) 화염의 링 끝을 먼저 멸균 한 다음 테스트 튜브의 나머지 부분으로 확장하여 살균하십시오. 약지, 새끼 손가락 및 오른손의 손바닥을 사용하여 세균 튜브와 기울어 진 테스트 튜브의 면 플러그 또는 테스트 튜브 캡을 동시에 당깁니다. 그리고 천천히 테스트 튜브 입을 멸균하십시오 (너무 뜨겁게 타지 마십시오). 연소 된 접종 링을 종자 튜브로 확장하고, 이끼가없는 테스트 튜브 또는 매체의 내벽에있는 접종 링과 접촉하고, 충분히 식히십시오. 그런 다음 약간의 이끼를 부드럽게 긁은 다음 튜브 예방 접종 링에서 꺼냅니다. 박테리아와 함께 접종 된 고리를 다른 테스트 튜브로 빠르게 확장하여 연결합니다. 경사면의 바닥에서 "Z" 모양을 위아래로 조밀하게 만듭니다. 때로는 박테리아의 성장 특성을 관찰하기 위해 비스듬한 접종을 위해 배지 중앙에 선을 당기기 위해 접종 바늘을 사용할 수도 있습니다. 접종이 완료된 후, 접종 루프가 철회되고 면 플러그가 삽입된다. 예방 접종 반지를 소독하십시오. 접종 루프를 내려고면 플러그를 조입니다.

2. 액체 접종

경사 매체를 액체 매체에 연결하십시오. 이 방법은 박테리아의 성장 특성과 생화학 반응의 측정을 관찰하는 데 사용됩니다. 수술 방법은 이전과 동일하지만 시험관 입이 위쪽으로 기울어 져서 배양액이 흘러 나와 박테리아를 연결하는 것을 방지합니다. 반지의 박테리아를 씻기 위해 반지와 튜브의 내벽을 몇 번 문질러주십시오. 접종 후, 면 플러그를 삽입하고, 시험 튜브를 손바닥에 부드럽게 두드려 박테리아를 완전히 분산시킵니다. 액체 매질로부터 액체 매체를 접종한다. 균주가 액체 인 경우 접종 링 외에도 멸균 피펫 또는 드로퍼를 사용하십시오. 접종 할 때 화염 옆의면 플러그를 꺼내고 튜브의 입을 화염을 통과시키고 멸균 된 피펫을 사용하여 박테리아 용액을 배양 용액으로 빨아들입니다. 고르게 흔들어주세요.

3. 플레이트 접종

점수를 매기고 접시에 박테리아를 퍼뜨립니다. 크로스 라인 접종 별도의 크로스 라인 방법을 참조하십시오. 확산 및 접종 멸균 피펫으로 박테리아 용액을 접시에 넣고 멸균 된 유리 막대로 판 표면을 고르게 코팅합니다.

4. 예방 접종

박테리아를 고체 깊은 배양 배지에 접종하십시오. 이 방법은 박테리아를 식별 할 때 혐기성 박테리아를 접종하거나 생리 학적 성능을 관찰하는 데 사용됩니다. 조작 방법은 위와 동일하지만 사용 된 접종 바늘은 직선이어야합니다. 배양 매체의 중심에서 튜브 바닥에 가까워 질 때까지 접종 바늘을 뚫어 뚫은 다음 원래의 천공 경로를 천천히 꺼냅니다.

二 、 분리 가동 방법:

1. 희석 분리 방법

연속 희석에 의해 분리 된 샘플을 최소한으로 분산 한 다음 일정량을 접시에 넣고 용융에 적합한 한천 매질과 혼합하십시오. 분산 된 박테리아가 제자리에 고정되어 단일 콜로니를 형성합니다. 대장균 또는 효모는 박테리아 현탁액으로 멸균 된 물로 준비됩니다. 각각 9 ml의 멸균 물을 함유 한 여러 멸균 시험관을 가져갑니다. 준비된 박테리아 현탁액 1ml 를 피펫하고 멸균 물 9ml 를 함유 한 첫 번째 테스트 튜브에 넣고 10-2 로 10 번 희석합니다. 첫 번째 테스트 튜브 (10-2) 에서 1ml 를 꺼내 멸균 물이 들어있는 두 번째 테스트 튜브에 주입하여 100 번 희석합니다 (10-2). 그것이 10-5-10-6 으로 희석 될 때까지 같은 방식으로 작동합니다. 10-5-10-6 에서 각 희석액의 0.2 ml의 박테리아 용액을 정확하게 그려 내고 번호가 매겨진 빈 멸균 접시에 첨가하십시오. 세 가지 요리를 만들기 위해 동일한 희석을 반복하십시오. 녹아서 45 까지 냉각 된 한천 배지를 위에서 언급 한 각 판에 붓고 부드럽게 회전하여 응고 후 매체와 박테리아 현탁액을 완전히 혼합합니다. 그것을 37 도 또는 38 도 인큐베이터에 넣고 24-48 시간 동안 배양하고, 관찰하십시오. 접시에 식민지의 성장과 분포.

2. 평평한 침대 서기관 분리 방법

판 줄무늬 분리법은 판 매질 표면의 접종 고리를 구역 설정으로 나누어 미생물을 분리하는 방법이다. 원리는 분리 목적을 달성하기 위해 고체 배지 표면의 미생물 샘플을 "지점에서 선으로" 여러 번 희석하는 것입니다. 접시를 부어 쇠고기 추출물 후추 한천 매체를 녹이고 접시를 부은 다음 굳을 때까지 수평으로 두십시오. 알코올 램프의 불꽃에 접종 링을 태우고 냉각을 기다리고 Staphylococcus aureus와 Escherichia coli의 혼합 접종 액체를 섭취하십시오. 화염에 접근하면서 왼손에 한천 판을 잡고 뚜껑을 약간 들어 올리십시오. 접종 링을 오른쪽에 잡고 접시로 확장하십시오. 접시의 한 부분에 서기관 선을 만드십시오. 접종 링은 플레이트의 표면으로부터 30-40 ° 이다. 부드럽게 각도를 터치하고 손목의 힘을 사용하여 표면을 가볍게 움직입니다. 태블릿의 표면을 긁거나 밑면에 넣지 마십시오. 접종 컵을 태워 접종 링에 남아있는 박테리아 액체를 죽입니다. 냉각 후 접종 링을 접시로 연장하십시오. 첫 번째 영역에서 교차 된 선과 약간 접촉 한 후 90 ° 회전하십시오. 두 영역은 계속 교차합니다. 마킹 후 접종 컵을 접종하고 냉각 후 동일한 방법을 사용하여 다른 영역에 선을 그립니다. 모든 선이 표시되면 접시의 바닥에 특수 크레용을 사용하여 변형, 날짜, 그룹 및 이름을 나타냅니다. 전체 페트리 접시를 거꾸로 놓고 일정한 온도 인큐베이터에 놓습니다. 37 재배 24-48 시간 후에 꺼내서 관찰하십시오. 식민지 스위치, 크기, 색상, 가장자리, 표면 구조, 투명도 등의 특성에주의하십시오.

三 、 주의 사항:

1. 접종실은 깨끗하게 유지하고, 분쇄 된 페놀 비누 액체로 조리대와 벽을 닦고, 젖산 또는 포름 알데히드로 정기적으로 훈증해야합니다. 사용하기 전에 UV 램프로 멸균해야합니다. 정기적으로 접종 실의 불임을 확인하십시오. 예방 접종실에 들어가기 전에 개인 위생을 먼저해야하며 완충 실에서 작업 신발, 모자, 작업복 및 마스크를 교체해야합니다. 작업복, 작업화 및 마스크는 예방 접종실에서만 사용할 수 있습니다. 다른 곳으로 갈 수 없으며 정기적으로 교체하고 소독해야합니다. 접종 된 시험관, 삼각형 및 병에는 배양 배지 및 균주의 이름과 날짜가 표시되어야합니다. 접종 실로 이동 한 모든 항목은 완충 실에서 70% 알코올로 깨끗하게 닦아야합니다. 접종하기 전에 70% 알코올이나 Xinjieer로 양손을 소독하고 수술 중에 알코올 램프의 불꽃을 남기지 마십시오. 탐폰은 무작위로 배치되지 않습니다. 접종 도구는 사용 전후에 화염을 멸균해야합니다.

2. 인큐베이터는 자주 청소하고 소독해야합니다.